肠易激综合征（IBS）是一种常见的消化系统疾病，会干扰胃肠道的正常运作。其显著的表现形式为反复的腹胀、腹痛以及排便习惯的异常。按照疾病的具体表现，IBS主要可以分为四种亚型，其中最为常见的是腹泻为主的IBS-D型。需要指出的是，IBS-D的发病率呈现逐年上升的趋势。白术芍药汤(BSD)源于《素问病机气宜保命集》，具备补益脾胃、柔肝敛阴之功效，可有效缓解腹痛、腹泻、腹胀等症状，广泛应用于治疗IBS-D。研究表明，BSD通过调节肠道免疫系统、减轻炎症反应、改善肠道运动等功能，发挥治疗效果。尽管如此，BSD对IBS-D个体产生影响的作用机制仍需进一步探讨。
日前，一篇发表在《Phytomedicine》杂志，名为“Baizhu shaoyao decoction restores the intestinal barrier and brain-gut axis balance to alleviate diarrhea-predominant irritable bowel syndrome via FoxO1/FoxO3a”的论文，研究了BSD对IBS-D相关症状的保护作用。
图1 论文首页
BSD改善IBS-D模型抑郁和腹泻
研究者构建IBS-D大鼠模型探究BSD在缓解IBS-D相关症状方面的作用，分别设置对照组（对照组大鼠灌胃生理盐水）、IBS-D（IBS-D大鼠灌胃生理盐水）及阳性对照组IBS-D+溴化钙（PVB）(IBS-D大鼠灌胃15 mg/kg PVB）。实验结果表明，IBS-D诱导组大鼠的体重明显轻于未治疗组（p<0.05）。然而，接受高剂量BSD治疗的大鼠体重有所增加（p<0.05）。此外，通过观察各组大鼠的粪便状况，发现IBS-D诱导组大鼠出现腹泻症状，而经BSD治疗后腹泻症状明显改善。值得注意的是，IBS-D诱导显著降低了大鼠的摄食量。实验结果进一步揭示，IBS-D组的大便频次和水分含量较对照组显著增加；而经过不同剂量的BSD和PVB处理后，这些参数均得到显著降低，为IBS-D模型提供了有力支撑。综上所述，BSD在缓解IBS-D相关症状方面具有显著作用。
图2 BSD可改善IBS-D大鼠的抑郁行为和肠道症状
BSD可恢复IBS-D大鼠肠道形态和肠道屏障功能
根据H&E和AB-PAS染色结果，对照组、IBS-D组、BSD-组和PVB处理组的大鼠肠道在结构和形态上没有显著差异，这表明这些大鼠的肠道没有受到损伤或变性。同时，各组间隐窝深度也未发现显著差异。然而，IBS-D组的绒毛长度明显短于对照组和高剂量BSD组。
此外，IBS-D组的绒毛高度/隐窝深度之比(V/C)相较于BSD治疗对照组、中剂量组和高剂量组显著降低。TUNEL实验结果显示，IBS-D组的细胞凋亡率明显升高，而BSD和PVB组的细胞凋亡率则明显减轻。
为了进一步探究肠道屏障功能的变化，研究者采用Western blotting技术对肠屏障相关蛋白进行了定量分析。结果显示，IBS-D大鼠肠道中claudin-1(CLDN1)和occludin的表达水平明显低于对照组。然而，PVB组和BSD组的显这些蛋白水平却呈现高水平。此外，与对照组相比，IBS-D大鼠肠道中Zo1、Cldn1和Ocln的mRNA水平显著降低，而DASD和PVB增加了IBS-D大鼠的转录水平。
综上所述，这些结果表明BSD可有效恢复IBS-D大鼠肠道形态和肠道屏障功能。
图3 BSD可恢复IBS-D大鼠肠道形态和肠道屏障功能
BSD通过降低回肠sIgA含量减轻IBS-D
为了深入研究BSD对大鼠IBS-D的作用机制，研究者将对照组、IBS-D组和BSD-M治疗组大鼠的肠组织转录本进行了测序。对比对照组，IBS-D组表现出158个基因上调和34个基因下调（图4A）。而BSD处理组则有1012个基因上调和1784个基因下调（图4B）。此外，肠道内sIgA含量与IBS-D的发生呈正相关。GSEA分析显示，IBS-D大鼠的sIgA产生相关通路上调（图4C）。通过KEGG途径和GO富集分析，发现BSD治疗组和IBS-D组之间差异表达基因（DEGs）主要涉及sIgA产生途径的免疫网络和白细胞介素-2产生的正调控（图4D和4E）。
接下来，采用ELISA法对肠道sIgA进行了定量分析，结果显示IBS-D组sIgA水平显著高于对照组（p<0.01），而BSD和PVB显著降低了IBS-D组的sIgA含量（p<0.01）。此外，IHC分析确定了sIgA在肠道中的分布，其结果与ELISA结果一致。综上，初步结果表明，BSD通过抑制sIgA的表达来治疗大鼠IBS-D。
图4 BSD通过降低回肠中sIgA含量来减轻IBS-D
BSD调节IBS-D大鼠FoxO1和FoxO3a的表达
在对照组、BSD-M处理组和IBS-D组之间差异表达基因的KEGG通路分析中，发现FoxO信号通路显著富集（如图5A所示）。因此，研究者深入探究了参与FoxO信号通路的多种因子的蛋白和mRNA水平。与对照组相比，IBS-D大鼠肠道内的Foxo1、Foxo3和Gsk3b的mRNA表达水平显著升高（p<0.05或p<0.01）。
此外，BSD-组和PVB-组大鼠肠道内的Foxo1和Gsk3b的mRNA表达水平均高于IBS-D组（p<0.01）。值得一提的是，BSD-H组肠道内的Foxo3 mRNA水平高于IBS-D组（p<0.01；如图5B所示）。
免疫印迹实验显示BSD和PVB可以下调IBS-D大鼠肠道内的FoxO1和FoxO3a的蛋白水平（p<0.01；如图5C和5D所示）。这些数据表明，FoxO信号通路在IBS-D的缓解过程中可能发挥重要作用。
图5 BSD调节IBS-D大鼠回肠Foxo1和FoxO3a的表达
BSD抑制IBS-D大鼠肠肥大细胞(MCs)和脑肠肽
研究者采用甲苯胺蓝O染色法对肠道MCs进行了定量分析。对比IBS-D组与对照组，IBS-D组肠道MCs的平均累积光密度(IOD)显著增高。
在肠道结构方面，IBS-D大鼠的肠绒毛出现了大量破裂，肠上皮细胞核呈现出异常的囊泡结构。经过BSD治疗后，IBS-D大鼠的肠道结构恢复正常，与对照组无显著差异。
此外，通过对大鼠肠道中的脑肠肽进行量化分析观察到。IBS-D组中MCT、VIP、SP、PAF、CCK和GMFB的丰度较对照组均有所升高。值得让人关注的是，经过BSD治疗后，IBS-D大鼠肠道内所有脑肠肽由低水平恢复至与对照组相似的水平。
综上所述，BSD对于减轻IBS-D大鼠的肠道应激反应、改善肠道功能障碍具有积极作用。这些发现为BSD在IBS-D治疗中的应用提供了有力证据。
图6 BSD抑制IBS-D大鼠肠肥大细胞(MCs)和脑肠肽
结论
本研究证实了BSD对IBS-D大鼠腹泻、腹痛和抑郁的有益作用，表明FoxO信号通路在BSD诱导的肠道恢复过程中发挥了作用，有助于IBS-D大鼠屏障功能的修复。
参考文献：
Wei Y, Fan Y, Huang S, Lv J, Zhang Y, Hao Z. Baizhu shaoyao decoction restores the intestinal barrier and brain-gut axis balance to alleviate diarrhea-predominant irritable bowel syndrome via FoxO1/FoxO3a. Phytomedicine. 2024 Jan;122:155163. doi: 10.1016/j.phymed.2023.155163.
作者｜梅斯医学编辑 | 竹子 #artContent h1#artContent p img#artContent table
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